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模型制备

小鼠脑血管痉挛模型

2018年10月31日 浏览量: 评论(0) 来源:《人类疾病动物模型复制方法学》 作者:周光兴 责任编辑:yjcadmin

(1)复制方法  雄性小鼠,体重为25~30g。

1)SAH的复制  经腹腔注射戊巴比妥钠(60mg/kg体重)麻醉,手术区域皮肤消毒。切开分离右侧股动脉并插管,以备抽取60μl自体血进行颅内注射用(在颅内注射60μl的量时外漏最少,且鼠死亡率最低)。小鼠头部前倾30°,头顶后部正中切口,暴露头骨。选用30号穿刺针从脑后下部中线向左向下45°穿刺进入枕大池。由股动脉抽取60μl自体血(随后腹腔注射60μl生理盐水以补充正常体液量)缓慢注入枕大池,持续时间约1min。当注入20μl时,动物呼吸出现异常,注入到60μl时,可能发生呼吸暂停。注射结束后立即使动物头前倾75°,持续10min,以使血液在枕大池内扩散开来。缓慢抽出穿刺针,创面点滴2~3滴(按2.50×10000U/ kg体重的剂量)庆大霉素,结扎股动脉并抽出插管,仔细缝合切口以防脑脊液和血液外漏。手术期间保持动物体温在37℃。动物于术后1h清醒并逐渐恢复正常摄食,正常术后死亡率<5%。

2)脑血管造影检查  可分别于SAH后1, 6, 12h和1, 1.5, 2, 3, 4, 5和7d进行脑血管造影:经左心室插管,以5.5ml/min的速度灌注10%甲醛溶液2min,采用立体显微摄像测量大脑前动脉、大脑中动脉和基底动脉。

3)组织学检查  动物先以0.1mol/L的磷酸缓冲液灌洗,随后以4%多聚甲醛和含有2.5%的谷氨酸盐混合的0.1mol/L的磷酸缓冲液灌洗,速度为5.5ml/min。迅速摘除鼠脑并继续固定在上述液体中(4℃)24h,分离大脑前动脉、大脑中动脉和基底动脉,做0.5μm厚度的切片,甲苯胺蓝染色。

(2)模型特点  在SAH后2d内大脑前动脉和基底动脉上方、大脑中动脉附近均有血凝块,大脑前动脉周围血凝块最多且清除缓慢,脑顶部血凝块在SAH 3~4d后基本消失。大脑前动脉在SAH后1h开始收缩,其直径可减少30%~40%,并持续1~3d,至第7日时,血管直径逐渐恢复正常。大脑中动脉和基底动脉在SAH后6h收缩达20%~25%,并持续1~1.5d。病理组织学检查可见,在SAH 1d后,血管壁的内弹性层明显皱缩、管腔狭窄、管壁增厚。血管的平滑肌细胞无明显异常。准确的操作可避免脑干、脊髓和小脑的损伤。

(3)比较医学  截至目前,还没有一个完全可以模仿人类DCV的动物模型。根据Schwartz的描述,良好的DCV模型应具有:①持续性的蛛网膜下腔出血。②出血量可控。③出血机制酷似血管瘤的破裂。④血液的分布与蛛网膜下腔出血一致。⑤容易操作且价格合理。理想的实验方法应该是直接刺破血管壁,使血液流出。然而此种方法动物死亡率很高。此模型采用直接枕大池注血模拟了血管瘤破裂的方式,血液分布与SAH相似,并引起持续的血管痉挛,病理变化与人类DCV相似。而且具有重复性好、操作简便、成本低、死亡率低的特点。

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