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疾病与药物研究

左旋布比卡因和布比卡因对兔膝关节软骨毒性和细胞凋亡影响

2018年10月25日 浏览量: 评论(0) 来源:Brazilian Journal of Anesthesiology (English Edition) Available online 7 August 2018 作者:李晓菲译 责任编辑:admin
摘要:单剂量注射或局部麻醉剂连续输注到关节间隙被认为是一种明确的镇痛技术。本研究旨在观察单剂 量左旋布比卡因和布比卡因关节内注射对兔膝关节组织的软骨毒性和凋亡作用。
摘要:单剂量注射或局部麻醉剂连续输注到关节间隙被认为是一种明确的镇痛技术。本研究旨在观察单剂
量左旋布比卡因和布比卡因关节内注射对兔膝关节组织的软骨毒性和凋亡作用。
 
材料和方法:将动物分为两组,每组20只。0.5%左旋布比卡因(L组)和0.5%布比卡因(B组)关节内注射于兔左后关节。同时用生理盐水对两组家兔右后腿膝关节进行生理盐水注射,作为对照组(S组)。关节内注射后第7、28天,每组随机选取10只家兔,分别用硫喷妥钠腹腔注射处死。对软骨组织切片进行光镜染色,TUNEL法检测细胞凋亡。
 
结果:免疫荧光显微镜观察,B组7、28天凋亡细胞数均显著高于L、S组。第7天和第28天L组凋亡细胞数均显著高于S组
 
结论:我们发现布比卡因比其他麻醉剂更具软骨毒性,并增加凋亡细胞的数量。这些结果表明布比卡因比左旋布比卡因具有更高的软骨毒性,导致更多的细胞凋亡。
 
关键词:凋亡  布吡卡因  软骨毒性  左旋布比卡因  局部麻醉
 
简介:对病人而言术后疼痛是一个极其重要的问题。使用局部局麻药治疗术后疼痛是一种安全有效的方法。近年来,随着局部麻醉方法的发展,局部麻醉药用于术后镇痛的应用越来越广泛。现今,单剂量注射或局部麻醉剂持续注入关节腔被认为是一种明确的围手术期镇痛技术,特别是在肩关节和膝关节镜检查中。
然而,近年来,我们遇到越来越多的关于长期单独或与其他药物联合使用局部麻醉剂导致软骨细胞损伤的研究和病例报告。这种情况引起了人们对这些技术的关注。布比卡因是一种高效、长效的药物,是临床应用的首选药物。另外,布比卡因是一种局部麻醉剂,有心脏毒性、肌毒性和神经毒性作用,左旋布比卡因是纯布比卡因的对映体。外消旋布比卡因的心脏毒性作用与R(+)对映体有关,因此,为了获得较少的心脏毒性药物,开发了左旋布比卡因。虽然文献上有一些关于布比卡因和左旋布比卡因对软骨细胞的毒性作用的研究,但是尚缺乏足够的研究来比较左旋布比卡因和布比卡因在软骨细胞中的潜在凋亡活性。我们旨在调查和比较布比卡因和左旋布比卡因对软骨细胞的潜在凋亡作用作为软骨毒性的指标。
 
实验设计:四十只新西兰雌性兔(2±0.2 kg)随机分为两组,每组20只。禁食6小时后,肌肉注射麻醉剂盐酸氯胺酮(10mg/kg),然后用38G胰岛素注射器进行关节内注射。第一组(L组),左后膝关节注射0.5%,0.25mL左旋布比卡因。第二组(B组)用相同浓度和体积的布比卡因左后膝关节注射。以同样的方法,将生理盐水(0.25mL,0.9%浓度)注射到各组兔的右后膝关节,并作为对照组(S组)。注射后,将各组兔放入笼内,12h/12h光/暗循环、温度和饮食等相同,饲养在同一室内,以获得最佳生活条件。关节内注射后第7、28天,每组随机选择10只家兔,腹腔注射硫喷妥钠(150mg.kg_1)处死。无菌条件下取出膝关节,不损伤关节囊。然后,使用解剖刀从关节软骨中取出1厘米长的组织块。对于光和免疫荧光显微镜检查,软骨组织样品固定在10%中性福尔马林溶液中48小时。固定后,将组织保存于60℃的石蜡中过夜。切片HE 染色,此外,切片用 TUNEL凋亡检测试剂盒染色以确定凋亡活性,并用免疫荧光显微镜检查。
 
光镜检测:在10%中性福尔马林中固定48小时后,组织样品在自来水下洗涤,然后乙醇(分别为70%、80%、90%、96%和100%)脱水。在三个单独的容器中,在相同浓度下将组织保持在二甲苯中1小时。将60℃的液体石蜡加入到组织薄片模具中,然后在室温下凝固一夜。切片机切片(5μm厚)。组织切片在二甲苯中放置两次,每次20分钟,,然后分别用90%、80%和70%乙醇水合10min。然后将切片保存在蒸馏水中5分钟,用苏木精染色8分钟。然后在酸性酒精溶液中洗涤切片,用伊红染色4分钟。将组织切片用70%、80%和90%酒精脱水,并在二甲苯中保存10分钟。组织切片上用盖玻片覆盖,在光学显微镜下观察。
 
免疫荧光显微镜检查:将5微米厚的切片置于载玻片上,在60℃保温1小时,然后两次浸入二甲苯中10分钟。分别浸泡99%、96%、70%和50%乙醇5分钟后,在PBS中洗涤5分钟。将蛋白酶K滴在切片上,在等待15分钟后,将切片在蒸馏水中洗涤两次,共2分钟。然后将切片置于3% H2O2中,然后在蒸馏水中洗涤5次,去除内源过氧化物酶。切片分别用平衡缓冲液、TDT酶停止/洗涤缓冲液和抗地高辛进行偶联处理。?对比染色后,切片用覆盖培养基覆盖。光镜下观察H&E染色切片的凋亡特征为核浓缩和碎裂。TUNEL法标记凋亡细胞核,病理学家随机选择10个不同的区域,测定凋亡细胞的数目。
 
结果:光镜观察:软骨细胞及其区域间基质无炎性细胞浸润。免疫荧光显微镜观察:第7天和第28天,免疫荧光显微镜观察0.9%生理盐水组(S组)软骨组织切片中凋亡软骨细胞,平均单位偏差为1.9±1.6,标准偏差为2.0±1.7。布比卡因组(B组)在注射布比卡因后第7天和第28天,软骨组织切片中观察到凋亡软骨细胞,其平均和标准偏差分别为5.0±3.1和5.2±3.5。左旋布比卡因组(L组)在注射左旋布比卡因后第7天和第28天,软骨组织切片均可见凋亡软骨细胞,其单位面积平均偏差为2.7±1.9,标准偏差为3.3±2.3。第7天和第28天B组凋亡细胞数均显著高于L、S组。第7天和第28天L组凋亡细胞数均显著高于S组。
 
结论:在这项研究中,我们确定左旋布比卡因引起比布比卡因的凋亡活性减慢和较慢。虽然我们的研究需要进一步的研究支持,但左旋布比卡因对软骨毒性较小,建议作为关节镜手术病人术后镇痛的关节内局部麻醉注射的首选药物。
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